酵母的分离培养工作是啤酒生产的一项重要内容，因为酵母菌种的强壮、纯粹与否，直接影响到发酵情况以及啤酒的口感和风味。同时，酵母菌与其他微生物一样，受外界条件的影响，往往会产生衰老、变异、混杂。因此，在生产上为保持酵母纯粹、强壮，须经常进行分离培养工作。
啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的酵母菌株与混杂的或衰老的酵母分离并挑选出来，加以扩大培养，供生产使用。分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离培养法和划线分离培养法。
（1）平板分离培养法
平板分离培养法又称稀释分离法，此法简便易行，可用于分离纯化生产上使用的菌种，其步骤如下。
①取已灭菌的琼脂麦芽汁培养液分别倾倒于十几只培养皿中，每只培养皿中10~15mL。
②分别用无菌吸管吸取10mL无菌水于已灭菌的10支试管中。
③用接种环挑取少许菌种接于第1支无菌水试管中，塞上棉塞，充分摇匀，制成悬浊液。
④用灭菌的吸管吸取摇匀了的稀释液1mL于第2支无菌水试管中，用同样的方法再从第2支转接到第3支，这样重复地连续下去，达到10-7~10-5的稀释倍数。
⑤用吸管吸取10-7~10-5的稀释液0.2~0.5mL分倒在培养皿中，并在其上面倒以灭菌琼脂麦汁培养液3~5mL，用手摇匀。
⑥将培养皿置于25~27℃的培养箱中，培养2~3天，每天检查菌落生长情况，剔除形态上有改变的菌落，选择形态正常、细胞大小均匀的菌落进行培养。必要时可进行2~3次重复分离。
（2）划线分离培养法
此法与平板分离培养法的原理类似，但又有其自身特点。划线法简单，速度较快；平板法在平板上分离的菌落单一均匀，获得纯种的概率略高。
用接种针挑取适当稀释的菌液，直接在已灭菌的平皿培养基上划线（注意不要划破固体培养基），使接种到培养基表面的菌体数逐渐减少，在最后划到的区域可能得到单一菌落。然后将所需要的菌落移植到斜面培养基上，以待进一步检查。这个方法一般用于分离纯化生产上已有的菌种。
分离的菌源可以是汉生罐内的菌液、生产现场旺盛的发酵液或者使用3~5代的酵母泥，也可以是实验室保存的原菌种。如原菌种作分离的菌源，必须先经过几次培养活化后再进行分离。
